SREBP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423152

Visão geral

Srebf1 codifica a proteína 1 de ligação a elementos regulatórios de esteróis (SREBP-1), um fator de transcrição ancorado à membrana que é ativado por proteólise para controlar programas de metabolismo de lipídios e carboidratos. Em células de camundongo, a SREBP-1 promove a expressão de enzimas necessárias para a síntese de novo de ácidos graxos e triglicerídeos e conecta sinais nutricionais e hormonais a redes gênicas lipogênicas por meio de regulação transcricional dependente de SREBP. Essa via se integra à sinalização de insulina e mTOR, à homeostase do retículo endoplasmático (RE) e à biogênese de membranas, influenciando a adipogênese e a remodelação metabólica de hepatócitos. A atividade desregulada de SREBP-1 é amplamente utilizada como eixo mecanístico em modelos de esteatose hepática, resistência à insulina associada à obesidade e inflamação induzida por lipídios.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SREBP-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Srebf1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Srebf1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Srebf1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SREBP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Srebf1 para a investigação da sinalização de SREBP-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Srebf1 críticos para a função SREBP-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Srebf1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SREBP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SREBP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Srebf1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SREBP-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SREBP-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Srebf1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Srebf1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.