SRCAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403049-ACT

SRCAP（Snf2関連CREBBP活性化タンパク質）はATP依存性のクロマチンリモデリング因子をコードし、SRCAP複合体の触媒中核として機能します。SRCAP複合体は、プロモーターおよびエンハンサーにおいて、通常型ヒストンH2AをヒストンバリアントH2A.Zへ置換する反応を触媒します。H2A.Zの導入を介して、SRCAPはヌクレオソーム配置とクロマチンアクセシビリティを調節し、細胞周期進行、DNA損傷応答、系譜特異的分化に関連する転写プログラムの協調に寄与します。さらにSRCAPは、CBP/CREBBP関連の転写制御や、より広範なエピジェネティックな遺伝子発現制御とも機能的に連携します。SRCAPの発現異常や変異は発生障害および転写恒常性の破綻と関連することが示されており、疾患関連の細胞状態におけるクロマチンリモデリング機構の解明を目的とした研究が進められています。

SRCAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SRCAPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SRCAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SRCAP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSRCAP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SRCAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSRCAP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSRCAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSRCAP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSRCAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。