SR-2C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400886-ACT

HTR2C codifica o receptor humano de 5-hidroxitriptamina 2C (SR-2C), um receptor acoplado à proteína G que sinaliza principalmente via Gq/11 para ativar a fosfolipase C, aumentar a mobilização de Ca2+ intracelular e acionar cascatas de fosforilação dependentes de PKC. O SR-2C também influencia a sinalização MAPK/ERK e regula a liberação de neurotransmissores por meio da modulação da excitabilidade neuronal e da transmissão sináptica em circuitos serotoninérgicos. Por essas vias, o HTR2C contribui para o controle central do apetite, do humor e de saídas endócrinas/autonômicas, e sua desregulação tem sido associada a fenótipos neuropsiquiátricos e metabólicos em estudos experimentais e genéticos. Essas características tornam o HTR2C um alvo útil para investigar a dinâmica de sinalização de GPCRs, os efeitos de edição/isoformas do receptor e a comunicação cruzada entre vias em modelos celulares neuronais e neuroendócrinos.

SR-2C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HTR2C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SR-2C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HTR2C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HTR2C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SR-2C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HTR2C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SR-2C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SR-2C em células tumorais com expressão de HTR2C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.