SR-2B CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420994-ACT

マウスのHtr2bは、セロトニン受容体SR-2B（5-HT2B）をコードしており、主にGq/11を介してシグナル伝達するGタンパク質共役受容体（GPCR）です。これによりホスホリパーゼCの活性化、イノシトールリン酸代謝回転、細胞内Ca²⁺動員、ならびに下流のPKC/ERK依存的な転写プログラムが誘導されます。SR-2Bは、神経調節性および末梢のセロトニン作動性シグナルを調整し、神経細胞の興奮性、血管緊張、組織リモデリング応答に影響を与えます。Htr2b活性の変化は、神経行動学的表現型、心血管・肺のリモデリング過程、炎症性シグナル環境などに関連する、セロトニン経路出力の調節異常と関連づけられています。膜受容体としての結節点であるSR-2Bは、受容体駆動性の遺伝子発現、セカンドメッセンジャー連関、MAPK系やCa²⁺依存性ネットワークとの経路クロストークを研究するための、扱いやすい導入口となります。

SR-2B CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Htr2bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SR-2B CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Htr2b 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHtr2b転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SR-2Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHtr2b遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSR-2B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHtr2b発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSR-2B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。