SR-2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401532

概要

HTR2A は、ヒトの 5-ヒドロキシトリプタミン受容体 2A（SR-2A）をコードする。SR-2A は G タンパク質共役型受容体（GPCR）であり、主に Gq/11 と共役してホスホリパーゼ C シグナル伝達、イノシトールリン酸代謝回転、細胞内 Ca²⁺ 動員、ならびにプロテインキナーゼ C（PKC）活性化を促進する。SR-2A は神経細胞の興奮性とシナプス可塑性を調節し、MAPK/ERK などのセカンドメッセンジャー経路とのクロストークを介して、より広範な神経伝達物質ネットワークとも相互作用する。HTR2A の発現やシグナル伝達の変化は、セロトニン作動性トーンの変化や受容体媒介性の皮質回路機能などを含む神経精神疾患関連表現型の文脈で、しばしば検討されている。複雑な制御ダイナミクスをもつ膜受容体として、SR-2A はヒト細胞モデルにおける経路特異的シグナル伝達や受容体の脱感作／内在化機構を解析するうえで、扱いやすい標的（ノード）となる。

SR-2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHTR2A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HTR2A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HTR2Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SR-2Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SR-2Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HTR2A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SR-2Aの機能に不可欠なHTR2Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HTR2Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SR-2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSR-2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HTR2A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SR-2A HDRプラスミド（h）および SR-2A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHTR2Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHTR2A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。