Squalene epoxidaseCRISPR激活质粒(h): sc-402870-ACT

SQLE 编码角鲨烯环氧化酶（squalene epoxidase），这是一种黄素依赖性单加氧酶，可催化角鲨烯环氧化生成 2,3‑氧化角鲨烯；该反应是甾醇生物合成中关键且影响速率的承诺步骤。作为一种与内质网（ER）相关的酶，SQLE 有助于调控胆固醇及其他甾醇水平，因此其活性与膜组成、脂筏动态以及类固醇生成前体的可用性密切相关。SQLE 受细胞脂质状态调控，并与由 SREBP 驱动的代谢程序相交汇，这些程序共同协调胆固醇稳态及更广泛的脂质代谢。SQLE 表达失调与甾醇通量改变和代谢重编程有关，这类现象在多种与疾病相关的情境中均可观察到，包括增殖性与炎症性状态。

Squalene epoxidase CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SQLE的表达。

Squalene epoxidase CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SQLE基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SQLE转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Squalene epoxidase表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SQLE位点，并能够研究内源性位点上依赖于Squalene epoxidase的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SQLE表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Squalene epoxidase通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。