Sprouty 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401299-ACT

SPRY1はSprouty 1をコードしており、FGFをはじめとする各種増殖因子入力の下流で負のフィードバックを担う、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達の細胞内阻害因子です。Sprouty 1はRAS–RAF–MEK–ERK/MAPK経路の活性を減弱させることで、発生や組織恒常性の過程における細胞増殖、遊走、分化の制御に寄与します。SPRY1の発現やシグナルバランスの変化は、がん化の文脈で見られる増殖因子応答の破綻や、血管・腎・発生生物学のモデルにおける異常と関連づけられてきました。経路調節因子として、Sprouty 1はMAPK依存的な転写プログラムにおけるシグナルの強度と持続時間を制御する役割の観点から、しばしば研究対象となっています。

Sprouty 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPRY1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sprouty 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPRY1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPRY1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sprouty 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPRY1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSprouty 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPRY1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSprouty 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。