SPPL2b Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405646-ACT

Il gene umano **SPPL2B** codifica la proteasi aspartilica intramembrana **SPPL2b**, un enzima di tipo signal peptide peptidase–like che scinde selettivamente alcune proteine di membrana di tipo II all’interno del doppio strato lipidico. Regolando il turnover dei substrati e la segnalazione mediata da frammenti di proteine di membrana, SPPL2b contribuisce alla proteostasi, al traffico endosomiale/lisosomiale e a eventi di processamento associati ai recettori che plasmano la comunicazione cellulare. L’attività di SPPL2b si interseca con vie che controllano il controllo qualità delle proteine e dinamiche di membrana rilevanti per il sistema immunitario, rendendola pertinente per studi sulla regolazione dell’infiammazione e sulla neurobiologia, in cui la proteolisi intramembrana può modulare gli output di segnalazione. Un processamento e un traffico anomali delle proteine di membrana sono spesso implicati in disturbi complessi, collocando **SPPL2B** come un nodo utile per indagini meccanicistiche in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

SPPL2b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SPPL2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SPPL2b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SPPL2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SPPL2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SPPL2b. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SPPL2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SPPL2b nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SPPL2b nelle cellule tumorali con espressione di SPPL2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.