SPA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406755

概要

SIPA1はSPA-1をコードしており、SPA-1はRap1のGTPase活性化タンパク質（GAP）としてGTP加水分解を促進し、Rap1シグナルを抑制して、インテグリン介在性接着、細胞骨格ダイナミクス、ならびに細胞移動を調整します。Rap1依存的なインサイドアウトシグナル伝達を調節することで、SPA-1は免疫細胞のトラフィッキング、細胞間接着部位の安定性、そして細胞外からの刺激に対する応答に影響します。SIPA1の発現や活性の変化は、腫瘍進展や転移能に関わる増殖・運動性プログラムの破綻と関連づけられています。こうした生物学的背景により、SIPA1は小型GTPaseネットワーク、接着依存的シグナル伝達、微小環境に駆動される細胞挙動を研究するうえで有用な結節点となります。

SPA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSIPA1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SIPA1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SIPA1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPA-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPA-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SIPA1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPA-1の機能に不可欠なSIPA1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SIPA1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SIPA1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPA-1 HDRプラスミド（h）および SPA-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSIPA1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSIPA1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。