Sox-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403896-ACT

SOX3 codifica o fator de transcrição Sox-3, um membro da família SOXB1 que se liga ao DNA por meio de um domínio HMG box e regula programas de expressão gênica que governam a manutenção de progenitores neurais, a especificação do neuroectoderma e o padrão de desenvolvimento inicial. Em conjunto com outros reguladores do desenvolvimento, o Sox-3 modula redes transcricionais que controlam decisões de destino celular, proliferação e diferenciação, incluindo vias que se cruzam com sinais dependentes de Wnt/β-catenina e de Notch em tecidos neurais. Alterações na dosagem de SOX3 ou perturbações regulatórias têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a características relacionadas ao sistema endócrino, refletindo seu papel na formação do eixo hipotálamo–hipófise e no comprometimento de linhagens celulares. Como regulador transcricional dependente do contexto, o SOX3 é amplamente estudado em modelos de células-tronco pluripotentes, sistemas de diferenciação neural e análises mecanísticas do controle enhancer–promoter.

Sox-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox-3 em células tumorais com expressão de SOX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.