Sox-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403896-ACT

SOX3 codifica il fattore di trascrizione Sox-3, un membro della famiglia SOXB1 che si lega al DNA tramite un dominio HMG box e regola programmi di espressione genica che governano il mantenimento dei progenitori neurali, la specificazione del neuroectoderma e il patterning precoce dello sviluppo. In sinergia con altri regolatori dello sviluppo, Sox-3 modula reti trascrizionali che controllano le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione, incluse vie che intersecano segnali dipendenti da Wnt/β-catenina e da Notch nei tessuti neurali. Alterazioni del dosaggio di SOX3 o perturbazioni della sua regolazione sono state associate a fenotipi di neuro-sviluppo e a tratti correlati al sistema endocrino, riflettendo il suo ruolo nella formazione dell’asse ipotalamo–ipofisario e nell’impegno di linea. In quanto regolatore trascrizionale dipendente dal contesto, SOX3 è ampiamente studiato in modelli di cellule staminali pluripotenti, sistemi di differenziazione neurale e analisi meccanicistiche del controllo enhancer–promoter.

Sox-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-3 nelle cellule tumorali con espressione di SOX3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.