Sos 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401135-ACT

ヒトSOS1は、Rasのグアニンヌクレオチド交換因子であるSos 1をコードしており、活性化された受容体型チロシンキナーゼとGRB2などのアダプタータンパク質を介してRAS活性化へ結び付け、GDPからGTPへの交換を促進します。この働きにより、RAF–MEK–ERK（MAPK）カスケードへのシグナル伝達を進めるとともに、増殖・分化・細胞運動・細胞骨格動態を制御するPI3K関連のシグナル出力とも連携します。SOS1活性は、膜へのリクルート、アロステリックなRAS結合、フィードバックリン酸化によって厳密に制御されており、成長因子応答性ネットワークにおける重要なノードとなっています。SOS1/RAS-MAPKシグナルの制御破綻は、がん化に関わるシグナル伝達生物学や発生異常と関連しており、経路のリワイヤリング、シグナル強度（振幅）の制御、文脈依存的な転写応答の機構研究を支えます。

Sos 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SOS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sos 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SOS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSOS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sos 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSOS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSos 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSOS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSos 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。