SNX5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404660

Panoramica

SNX5 umano (sorting nexin 5) codifica una proteina endosomiale contenente un dominio PX, in grado di legare i fosfoinositidi e di cooperare con fattori di rimodellamento di membrana per regolare lo smistamento dei carichi e il traffico vescicolare. SNX5 partecipa alle vie di trasporto dall’endosoma al Golgi e al riciclo endosomiale, favorendo il turnover dei recettori e l’attenuazione del segnale controllando la localizzazione subcellulare delle proteine transmembrana. Attraverso i suoi ruoli nella tubulazione endosomiale e nell’assemblaggio di complessi proteici, SNX5 influenza processi di omeostasi cellulare legati alla segnalazione mediata da recettori, all’assorbimento di nutrienti e alla composizione delle membrane. Alterazioni delle vie di traffico endosomiale che coinvolgono le sorting nexins sono associate a una deregolazione della segnalazione dei fattori di crescita e delle risposte allo stress cellulare, rendendo SNX5 rilevante per studi meccanicistici su difetti di traffico associati a patologie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SNX5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SNX5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SNX5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SNX5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SNX5 per lo studio della segnalazione di SNX5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SNX5 critici per la funzione di SNX5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SNX5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SNX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SNX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SNX5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SNX5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SNX5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SNX5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SNX5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.