SNX4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404032-ACT

ヒトSNX4（sorting nexin 4）は、PX-BARドメインを含むエンドソーム輸送因子であり、ホスホイノシチドに結合して膜形状を変化させ、取り込まれたカーゴのリサイクリングを支えます。SNX4は、エンドソームから形質膜への回収（リトリーバル）経路に関与し、カーゴのソーティングと管状エンドソーム形成を協調させることで、受容体の利用可能性とシグナル出力の維持に寄与します。小胞輸送における役割を通じて、SNX4は栄養取り込み、膜恒常性、シグナル伝達経路の空間的制御などの細胞プロセスに影響を及ぼします。エンドソームのリサイクリング異常やソーティングネキシン機能の破綻は、受容体ダイナミクスの変化やプロテオスタシス異常と関連することが多く、がん生物学や神経変性研究において重要なテーマとなっています。

SNX4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SNX4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SNX4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SNX4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSNX4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SNX4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSNX4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSNX4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSNX4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSNX4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。