SNX1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404470-NIC

Sorting nexin 1 (SNX1) è una proteina endosomiale contenente un dominio PX che lega il fosfatidilinositolo 3-fosfato e coopera con il complesso retromer per regolare lo smistamento endosomiale e il trasporto retrogrado dagli endosomi alla rete trans-Golgi. Modellando i tubuli di membrana endosomiali e influenzando il traffico dei recettori, SNX1 contribuisce a controllare il riciclo e la downregolazione di molteplici recettori di segnalazione, collegandosi a vie come EGFR e ad altre reti di recettori tirosin-chinasici. Il traffico dipendente da SNX1 influisce su processi di omeostasi cellulare, tra cui il turnover delle proteine di membrana, l’assorbimento di nutrienti e l’attenuazione della segnalazione. Un’espressione o una funzione deregolata di SNX1 è stata associata ad alterazioni della segnalazione dei recettori e della dinamica endosomiale, riportate in ambiti di ricerca che spaziano dalla biologia del cancro alla neurodegenerazione.

SNX1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SNX1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SNX1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SNX1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SNX1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.