Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNRPA (h): sc-404128

Présentation

SNRPA code la protéine A de la petite ribonucléoprotéine nucléaire U1 (U1 snRNP), un composant central essentiel du complexe U1 snRNP qui reconnaît les sites d’épissage 5′ lors de l’épissage du pré‑ARNm. En participant aux étapes précoces d’assemblage du spliceosome, SNRPA favorise une excision précise des introns, la maturation des transcrits et la coordination des programmes d’expression génique couplés à la transcription et au traitement de l’ARN. Une altération de la fonction de l’U1 snRNP peut entraîner un épissage alternatif étendu et une instabilité des transcrits, des processus fréquemment impliqués dans la transformation oncogénique ainsi que dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs. En tant que facteur spliceosomal fondamental, SNRPA est souvent étudié pour relier la fidélité de l’épissage à la protéostasie, au contrôle du cycle cellulaire et aux réseaux de régulation de l’ARN sensibles au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNRPA (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SNRPA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SNRPA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SNRPA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNRPA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SNRPA pour l'étude de la signalisation de SNRPA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SNRPA essentiels à la fonction de SNRPA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SNRPA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SNRPA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SNRPA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SNRPA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SNRPA plasmide HDR (h) et le SNRPA (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SNRPA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SNRPA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.