SNFT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403344-ACT

BATF3は、免疫系の系譜決定や刺激応答性の転写に結びつく遺伝子発現プログラムを制御する、塩基性ロイシンジッパー（bZIP）型転写因子をコードします。ヒト細胞では、BATF3はサイトカインやパターン認識受容体（PRR）シグナル伝達の下流にある転写ネットワークに関与し、抗原の処理・提示、インターフェロン関連応答、ならびにより広範な炎症経路に影響を及ぼします。BATF3依存性プログラムの破綻は、免疫監視の変化や炎症状態の異常制御と関連づけられており、腫瘍—免疫相互作用や感染関連の免疫病態の研究において重要です。転写制御因子としてのBATF3は、細胞運命の決定、クロマチン関連の遺伝子制御、微小環境からのシグナルに応じた文脈依存的な応答への影響という観点から、一般に検討されています。

SNFT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BATF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SNFT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BATF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBATF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SNFTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBATF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSNFT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBATF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSNFT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。