SNAT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401547-ACT

O SLC38A2 humano codifica o transportador de aminoácidos neutros acoplado ao sódio SNAT2 (Sistema A), um simportador da membrana plasmática que medeia a captação de pequenos aminoácidos neutros, como glutamina, alanina e serina. Ao regular a disponibilidade intracelular de aminoácidos, o SNAT2 influencia a deteção de nutrientes e a adaptação metabólica, incluindo o acoplamento à sinalização do mTORC1, às respostas integradas ao stress e a programas de volume celular/homeostase. A expressão de SLC38A2 é induzida de forma dinâmica pela privação de aminoácidos e por outros agentes de stress, ligando a atividade do transportador à autofagia, ao equilíbrio redox e ao fluxo biossintético. A atividade desregulada do SNAT2 tem sido estudada em contextos como o metabolismo do cancro, a resistência à insulina e microambientes inflamatórios, onde alterações no transporte de aminoácidos podem remodelar fenótipos de proliferação e de tolerância ao stress.

SNAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC38A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC38A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC38A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNAT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC38A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNAT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNAT2 em células tumorais com expressão de SLC38A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.