Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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SMP30 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401934
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SMP30 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SMP30, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SMP30 Antibody (E-11): sc-390098
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SMP30 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401934 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene umano **RGN** codifica per la **proteina marcatrice della senescenza 30** (SMP30/Regucalcina), una proteina legante il calcio coinvolta nell’omeostasi cellulare del calcio, nell’equilibrio redox e nella regolazione metabolica. SMP30 è stata associata alla modulazione della segnalazione intracellulare dipendente dal Ca2+, alla funzione mitocondriale e alle risposte allo stress ossidativo, processi che influenzano la sopravvivenza cellulare e i fenotipi associati all’invecchiamento. Un’alterazione dell’espressione di RGN/SMP30 è stata riportata in diversi contesti, tra cui il metabolismo epatico, lo stress infiammatorio e la biologia tumorale, rendendola rilevante per analizzare le vie che collegano la segnalazione del calcio all’adattamento cellulare allo stress. Lo studio della perdita o della disregolazione di RGN può chiarire i meccanismi di senescenza, la capacità di detossificazione e la riprogrammazione metabolica in modelli cellulari umani.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SMP30 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RGN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RGN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RGN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SMP30.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RGN per lo studio della segnalazione di SMP30, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RGN critici per la funzione di SMP30
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RGN per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SMP30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SMP30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RGN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SMP30 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SMP30 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RGN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RGN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.