SMC1α Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402865-ACT

SMC1A codifica per la proteina di mantenimento strutturale dei cromosomi 1α (SMC1α), un componente fondamentale del complesso cohesina che controlla la coesione delle cromatidi sorelle, la segregazione cromosomica e l’organizzazione della cromatina di ordine superiore. Attraverso l’estrusione di loop di DNA dipendente dalla cohesina e il coordinamento con CTCF, SMC1α influenza la regolazione trascrizionale, la tempistica della replicazione del DNA e il mantenimento della stabilità genomica. SMC1α partecipa inoltre alla segnalazione e alla riparazione del danno al DNA, supportando le risposte di checkpoint allo stress replicativo e alle rotture a doppio filamento. La disregolazione o le mutazioni di SMC1A e dei componenti della via della cohesina sono associate alle coesinopatie e sono state implicate nell’instabilità genomica e in programmi di espressione genica alterati rilevanti per la biologia del cancro.

SMC1α Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SMC1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SMC1α Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SMC1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SMC1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SMC1α. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SMC1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SMC1α nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SMC1α nelle cellule tumorali con espressione di SMC1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.