SMARCA4/Brg1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423026-NIC

マウスのSmarca4は、SWI/SNF（BAF）クロマチンリモデリング複合体のATPアーゼ触媒サブユニットであるSMARCA4/Brg1をコードしており、ヌクレオソームの配置を変化させることでプロモーターやエンハンサーへのアクセス性を調節します。ATP依存的なクロマチンリモデリングを介して、SMARCA4は細胞周期進行、系譜決定、DNA複製、DNA損傷応答を制御する転写プログラムと連携します。さらにSMARCA4/Brg1の機能は、Polycombによる抑制、p53シグナル、発生関連転写因子によって制御される経路と交差し、組織横断的にエピジェネティック状態を形成します。SMARCA4を含むSWI/SNF構成因子の制御異常は、がん化や発生表現型に関与するとされており、Smarca4はクロマチン基盤の遺伝子発現制御の機構研究における中心的な標的となっています。

SMARCA4/Brg1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Smarca4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Smarca4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Smarca4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Smarca4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。