Sm D3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405302-ACT

SNRPD3 codifica a proteína central humana Sm D3, um componente conservado do anel Sm que se monta em snRNAs ricos em U para formar snRNPs do spliceossomo. A Sm D3 sustenta a biogênese de snRNPs e a fidelidade do splicing de pré‑mRNA, processos intimamente acoplados à transcrição, ao controle de qualidade de RNA e a programas do ciclo celular. A perturbação de proteínas Sm pode desregular a escolha de sítios de splicing e o equilíbrio de isoformas de transcritos, contribuindo para um estresse amplo de processamento de RNA frequentemente observado em contextos proliferativos e de neurodesenvolvimento. Assim, SNRPD3 é um ponto de partida útil para estudar a montagem do spliceossomo, o metabolismo de snRNA e a regulação, dependente de splicing, de redes de expressão gênica.

Sm D3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNRPD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sm D3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNRPD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNRPD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sm D3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNRPD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sm D3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sm D3 em células tumorais com expressão de SNRPD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.