Slfn13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414596-ACT

O SLFN13 humano (membro 13 da família Schlafen) codifica a proteína Slfn13, uma proteína estimulada por interferon implicada na regulação da imunidade inata e em respostas ao estresse celular. As proteínas da família Schlafen são comumente associadas ao controle da progressão do ciclo celular, da diferenciação e de programas antivirais a jusante da sinalização de interferon tipo I, moldando estados transcricionais e traducionais durante a ativação imune. A expressão de SLFN13 tem sido associada a contextos inflamatórios e a interações entre tumor e sistema imune, o que a torna relevante para estudar como vias induzidas por interferon remodelam redes de expressão gênica em tipos celulares relevantes para doenças. Essas funções posicionam a Slfn13 como um nó útil para investigar circuitos de resposta ao interferon, mecanismos de evasão imune e regulação do crescimento dependente do contexto.

Slfn13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLFN13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Slfn13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLFN13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLFN13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Slfn13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLFN13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Slfn13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Slfn13 em células tumorais com expressão de SLFN13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.