SLC48A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426721

Descripción general

Slc48a1 codifica SLC48A1 (también conocida como gen 1 sensible al hemo, HRG1), un transportador de membrana lisosomal que exporta hemo desde el lumen lisosomal al citosol tras la eritrofagocitosis y el recambio endosomal/lisosomal de carga que contiene hemo. Al movilizar el hemo lisosomal para su catabolismo y reciclaje, SLC48A1 contribuye a la homeostasis del hierro, la desintoxicación del hemo y el manejo, mediado por macrófagos, del hemo derivado de eritrocitos. Esta actividad se integra con vías que controlan la degradación del hemo, las respuestas al estrés oxidativo y el reciclaje de hierro del sistema reticuloendotelial. La desregulación del transporte lisosomal de hemo es relevante en contextos de investigación inflamatoria y hematológica en los que un equilibrio anómalo de hemo/hierro contribuye al estrés tisular y a una función inmunitaria innata alterada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SLC48A1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc48a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc48a1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc48a1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SLC48A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc48a1 para la investigación de la señalización de SLC48A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc48a1 críticos para la función de SLC48A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc48a1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SLC48A1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SLC48A1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc48a1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SLC48A1 (m) y el plásmido HDR SLC48A1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc48a1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc48a1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.