SLC48A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426721

Panoramica

Slc48a1 codifica SLC48A1 (nota anche come heme-responsive gene 1, HRG1), un trasportatore di membrana lisosomiale che esporta l’eme dal lume lisosomiale al citosol in seguito all’eritrofagocitosi e al turnover endosomiale/lisosomiale di carichi contenenti eme. Mobilizzando l’eme lisosomiale per il catabolismo e il riciclo, SLC48A1 supporta l’omeostasi del ferro, la detossificazione dell’eme e la gestione, mediata dai macrofagi, dell’eme derivato dagli eritrociti. Questa attività si interfaccia con vie che controllano la degradazione dell’eme, le risposte allo stress ossidativo e il riciclo del ferro nel sistema reticoloendoteliale. La disregolazione del trasporto lisosomiale dell’eme è rilevante in contesti di ricerca infiammatoria ed ematologica in cui un’alterata bilancia eme/ferro contribuisce allo stress tissutale e a modifiche della funzione immunitaria innata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC48A1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc48a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc48a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc48a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLC48A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc48a1 per lo studio della segnalazione di SLC48A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc48a1 critici per la funzione di SLC48A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc48a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SLC48A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SLC48A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc48a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SLC48A1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SLC48A1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc48a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc48a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.