SLC48A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426721

概要

Slc48a1 は SLC48A1（ヘム応答遺伝子1、HRG1 とも呼ばれる）をコードしており、これはリソソーム膜に局在するトランスポーターです。SLC48A1 は、赤血球貪食（erythrophagocytosis）や、ヘム含有カーゴのエンドソーム／リソソームでの分解・ターンオーバーに続いて、リソソーム内腔から細胞質へヘムを輸送します。リソソーム内のヘムを分解・再利用のために動員することで、SLC48A1 は鉄恒常性、ヘムの解毒、ならびにマクロファージによる赤血球由来ヘムの処理を支えます。この機能は、ヘム分解、酸化ストレス応答、網内系における鉄リサイクルを制御する経路と連関しています。リソソームのヘム輸送の破綻は、ヘム／鉄バランスの異常が組織ストレスや自然免疫機能の変化に寄与する炎症・血液学研究の文脈において重要です。

SLC48A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc48a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc48a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc48a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SLC48A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SLC48A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc48a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SLC48A1の機能に不可欠なSlc48a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc48a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SLC48A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSLC48A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc48a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SLC48A1 HDRプラスミド（m）および SLC48A1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc48a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc48a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。