Ski CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422964

概要

SkiはSkiオンコプロテインをコードしており、細胞運命の決定を制御する遺伝子発現プログラムを調節する核内転写コレギュレーターである。マウス細胞においてSkiは、SMAD複合体やコリプレッサーと相互作用することでTGF-β/SMADシグナル伝達に拮抗し、その結果として上皮間葉転換（EMT）、細胞外マトリックス沈着、分化を方向づける因子として最もよく知られている。こうした経路への作用を通じて、Skiは増殖、系譜選択、組織リモデリングに影響を及ぼし、これらはいずれも発生異常やがん関連表現型でしばしば破綻する過程である。これらの制御機能により、Skiはシグナル依存的転写、クロマチン関連の抑制、文脈依存的な増殖制御を研究する上で有用な結節点となる。

Ski CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSki遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ski内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Skiのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Skiタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Skiシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ski欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Skiの機能に不可欠なSkiエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Skiゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ski CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSki CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ski遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ski HDRプラスミド（m）および Ski HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSkiホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSki標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。