Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SIRT7 Plasmide Double Nickase (m): sc-431608-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SIRT7 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SIRT7 Double Nickase Plasmid (m) e il SIRT7 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sirt7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SIRT7 Antibody (C-3): sc-365344
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SIRT7 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431608-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Sirt7** codifica **SIRT7**, una deacilasi nucleare NAD⁺-dipendente arricchita nel nucleolo, che regola la trascrizione dell’RNA ribosomiale, l’organizzazione della cromatina e la stabilità del genoma. SIRT7 modula i programmi trascrizionali attraverso la deacetilazione di substrati istonici e non istonici e si collega ai processi di biogenesi dei ribosomi, risposta al danno del DNA e vie di segnalazione dello stress metabolico. Un’attività alterata di SIRT7 è stata associata, in modelli sperimentali, a proliferazione deregolata, rimodellamento mitocondriale e metabolico e fenotipi cellulari legati all’invecchiamento. Queste funzioni rendono **Sirt7** un bersaglio utile per studi meccanicistici dell’omeostasi nucleolare, del controllo epigenetico dell’espressione genica e delle reti trascrizionali di adattamento allo stress.
SIRT7 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sirt7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sirt7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sirt7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sirt7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.