SIRT7CRISPR激活质粒(h): sc-401401-ACT

SIRT7 是沉默信息调节因子（sirtuin）家族中的一种核内 NAD⁺ 依赖性去酰化酶，参与调控染色质组织、核糖体 DNA 转录以及由 RNA 聚合酶 I 驱动的核糖体生物发生。SIRT7 通过调节组蛋白与非组蛋白底物，将表观遗传调控与细胞应激反应、代谢稳态以及基因组完整性的维持联系起来，其中包括 DNA 损伤应答和复制应激通路。SIRT7 活性异常与细胞增殖失衡、蛋白质稳态（proteostasis）紊乱以及线粒体功能异常相关，因此在致癌信号、衰老相关表型以及炎症或代谢功能障碍等研究中具有重要意义。因而，人源 SIRT7 常被用作研究节点，用于解析将核仁功能与细胞周期控制及应激适应相耦联的转录程序。

SIRT7 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SIRT7的表达。

SIRT7 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SIRT7基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SIRT7转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性SIRT7表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SIRT7位点，并能够研究内源性位点上依赖于SIRT7的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SIRT7表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SIRT7通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。