SIRT4 Double Nickaseプラスミド (r): sc-437316-NIC

SIRT4はミトコンドリアに局在するサーチュインで、NAD+依存性に代謝恒常性を調節し、栄養状態の感知、ミトコンドリア酵素活性、細胞内エネルギーフラックスに影響を及ぼします。ラット細胞では、SIRT4はミトコンドリア内の主要標的を翻訳後修飾レベルで制御することで、グルタミン利用、脂肪酸酸化、酸化ストレス応答などのプロセスを調節し、より広範なAMPK–mTORシグナル伝達やミトコンドリア品質管理経路とも関連づけられています。SIRT4活性の変化は、ミトコンドリア機能障害や代謝リモデリングの文脈で研究されており、レドックスバランスや生体エネルギー産生能の変動がストレス感受性に影響し得ます。こうした特性により、SIRT4はミトコンドリア制御、代謝リプログラミング、ストレス適応的シグナルネットワークの機序研究における有用な結節点となります。

SIRT4 ダブルニカースプラスミド（r）は、rat 細胞株における 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。