SIRT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425703

概要

Sirt2 は、NAD⁺ 依存性脱アセチル化酵素 SIRT2 をコードする。SIRT2 は主に細胞質に局在するサーチュインで、微小管動態、細胞周期の進行、代謝恒常性に関与するタンパク質のアセチル化を制御する。SIRT2 は、有糸分裂チェックポイントの制御、オートファジー、酸化ストレス応答などの重要な過程を調節し、栄養感知をミトコンドリア機能および細胞骨格機能へと結び付けている。マウス系では、SIRT2 活性が神経変性、炎症、代謝異常に関連する経路と結び付いていることが示されており、組織特異的なストレス耐性を検討する上で有用な結節点となる。SIRT2 依存的な脱アセチル化の変化は、転写プログラムやプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークに影響し、in vivo や初代細胞モデルにおける加齢関連表現型への感受性を形作り得る。

SIRT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSirt2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sirt2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sirt2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SIRT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SIRT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sirt2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SIRT2の機能に不可欠なSirt2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sirt2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SIRT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSIRT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sirt2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SIRT2 HDRプラスミド（m）および SIRT2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSirt2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSirt2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。