Siglec-6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416316-NIC

SIGLEC6は、シアル酸結合性の免疫グロブリン様レクチンであるSiglec-6をコードしています。Siglec-6は、特定の免疫細胞サブセットおよび胎盤の栄養膜細胞に発現し、糖鎖依存的な細胞間相互作用を媒介します。細胞質内の抑制性モチーフを介して、Siglec-6は受容体近傍のシグナル伝達や細胞の活性化状態を調節し、免疫寛容、接着、サイトカイン応答性などの過程に影響を与えます。Siglec-6の発現変化や、シアリル化依存的なリガンド結合は、免疫調節の破綻や炎症性微小環境、さらには一部の腫瘍—免疫インターフェースの特徴として研究されています。これらの特性により、SIGLEC6は、糖鎖—免疫チェックポイント、抑制性シグナル伝達ネットワーク、ならびに細胞表面受容体の組織化を解析するための有用な標的となります。

Siglec-6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SIGLEC6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SIGLEC6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SIGLEC6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SIGLEC6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。