Siglec-12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413805

Panoramica

SIGLEC12 codifica Siglec-12, una lectina atipica di tipo immunoglobulinico legante l’acido sialico, espressa in specifici contesti epiteliali e immunitari e localizzata sulla superficie cellulare. In quanto membro della famiglia delle Siglec, Siglec-12 partecipa a eventi di riconoscimento dipendenti dai glicani che possono influenzare le interazioni cellula–cellula, l’endocitosi e la modulazione degli output di segnalazione a valle di vie associate agli immunorecettori. La proteina umana è considerata funzionalmente distinta dalle Siglec inibitorie canoniche a causa di alterazioni in motivi conservati, risultando un modello utile per studiare la divergenza nella segnalazione dei recettori glico-immunitari. L’espressione deregolata di Siglec-12 è stata studiata nel contesto della biologia tumorale e dei microambienti infiammatori, sostenendo la ricerca su fenotipi dipendenti dalla glicosilazione e sul crosstalk immuno-epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Siglec-12 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SIGLEC12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SIGLEC12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SIGLEC12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Siglec-12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SIGLEC12 per lo studio della segnalazione di Siglec-12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SIGLEC12 critici per la funzione di Siglec-12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SIGLEC12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Siglec-12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Siglec-12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SIGLEC12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Siglec-12 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Siglec-12 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SIGLEC12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SIGLEC12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.