Shc Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400914-NIC

SHC1 codifica a proteína adaptadora Shc, um intermediário-chave de sinalização que conecta tirosina-quinases receptoras ativadas e receptores de citocinas a cascatas a jusante que controlam proliferação, sobrevivência, diferenciação e respostas ao estresse. Por meio de seus domínios PTB e SH2, a Shc se liga a receptores fosforilados e recruta GRB2/SOS para promover a sinalização RAS–RAF–MEK–ERK, podendo também interagir com PI3K/AKT e outras vias de MAPK, dependendo do estímulo e do tipo celular. O SHC1 participa da dinâmica de sinalização por fatores de crescimento, do tráfego de receptores e de programas transcricionais mitogênicos, tornando-se relevante para estudos de reprogramação da sinalização oncogênica e de mecanismos de resistência. Alterações na expressão ou na fosforilação de SHC1 têm sido associadas à ativação aberrante de vias em câncer e a respostas celulares desreguladas em contextos metabólicos e inflamatórios.

Shc O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SHC1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SHC1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SHC1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SHC1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.