Plasmide Double Nickase (h) Shank 1: sc-403064-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Shank 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Shank 1 Double Nickase (h) et le plasmide Shank 1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SHANK1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Shank 1 Antibody (E-1): sc-398630
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Shank 1 | sc-403064-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Shank 1 | sc-403064-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SHANK1 code Shank 1, une protéine d’échafaudage multidomaine enrichie au niveau des densités postsynaptiques excitatrices, où elle organise les récepteurs, les canaux ioniques et les complexes régulant l’actine afin de façonner l’architecture et la signalisation synaptiques. Grâce à ses interactions avec les protéines de la PSD et des régulateurs du cytosquelette, Shank 1 contribue à coupler les complexes de récepteurs glutamatergiques à des voies en aval qui gouvernent la maturation des synapses, la morphogenèse des épines dendritiques et la plasticité dépendante de l’activité. Des altérations de la fonction de la famille SHANK ont été associées à une désorganisation des synapses excitatrices et à des phénotypes neurodéveloppementaux, faisant de SHANK1 un nœud pertinent pour étudier les mécanismes qui influencent la connectivité des circuits. SHANK1 humain est donc largement étudié dans des modèles de différenciation neuronale et des essais de synaptogenèse afin de relier la dynamique des protéines d’échafaudage aux sorties fonctionnelles synaptiques.
Shank 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SHANK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SHANK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SHANK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SHANK1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.