SGLT-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-434235

概要

Slc5a2はナトリウム‐グルコース共輸送体SGLT-2をコードしており、腎近位尿細管上皮細胞の頂端膜を介したグルコース再吸収において、Na⁺勾配と共役して働く高容量の輸送体です。経上皮的なグルコースフラックスを調節することで、SGLT-2は細胞のエネルギーバランスや浸透圧恒常性に影響を与え、さらに溶質や水の尿細管での取り扱いを形作るイオン輸送過程とも相互に関与します。SLC5A2/SGLT-2活性の変化は、グルコース尿の異常や全身のグルコース恒常性の破綻と関連しており、代謝表現型および腎生理の研究において重要です。マウスでは、Slc5a2はグルコース輸送機構や、代謝ストレス応答に対する腎の寄与を検証するための扱いやすいモデルとなります。

SGLT-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc5a2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc5a2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc5a2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SGLT-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SGLT-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc5a2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SGLT-2の機能に不可欠なSlc5a2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc5a2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SGLT-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSGLT-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc5a2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SGLT-2 HDRプラスミド（m）および SGLT-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc5a2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc5a2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。