SerpinB6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417434

Panoramica

SERPINB6 codifica SerpinB6, un inibitore intracellulare delle serin-proteasi della classe (clade) B che contribuisce alla citoprotezione neutralizzando un’attività proteasica aberrante e limitando i danni cellulari indotti dalla proteolisi. Limitando l’azione delle serin-proteasi nel citosol e nel nucleo, SerpinB6 favorisce la proteostasi e i processi di risposta allo stress che influenzano sopravvivenza cellulare, differenziamento e segnalazione infiammatoria. L’espressione di SERPINB6 è particolarmente rilevante in contesti epiteliali e immunitari, in cui l’equilibrio tra proteasi e antiproteasi modella la funzione di barriera e l’omeostasi tissutale. Un’alterata attività delle serpine è stata associata a una diversa suscettibilità allo stress proteotossico e a patologie infiammatorie, rendendo SERPINB6 un utile bersaglio per studi meccanicistici sul controllo intracellulare delle proteasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SerpinB6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SERPINB6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SERPINB6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SERPINB6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SerpinB6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SERPINB6 per lo studio della segnalazione di SerpinB6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SERPINB6 critici per la funzione di SerpinB6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SERPINB6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SerpinB6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SerpinB6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SERPINB6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SerpinB6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SerpinB6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SERPINB6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SERPINB6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.