Serglycin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422394

概要

Srgnは、造血系細胞で高発現するプロテオグリカンであるセルグリシン（serglycin）をコードしており、分泌顆粒内でプロテアーゼ、ケモカイン、その他の生理活性メディエーターを梱包・貯蔵するための足場として機能する。マウスの免疫細胞では、セルグリシンはコアタンパク質に付加されたコンドロイチン硫酸修飾を介して、顆粒形成（生合成）、調節性エキソサイトーシス、および細胞外マトリックスとの相互作用に寄与する。これらの機能により、Srgnは自然免疫・獲得免疫のエフェクター応答、炎症シグナル伝達、ならびにプロテアーゼ依存的なリモデリングを制御する経路と関連づけられる。セルグリシンの生物学的性質の変化は、免疫活性化の制御不全や腫瘍関連の微小環境プロセスに関与すると示唆されており、炎症やがん生物学の機構研究における重要性を裏付けている。

Serglycin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSrgn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Srgn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Srgnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Serglycinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Serglycinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Srgn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Serglycinの機能に不可欠なSrgnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Srgnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Serglycin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSerglycin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Srgn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Serglycin HDRプラスミド（m）および Serglycin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSrgnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSrgn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。