SENP8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405158

概要

SENP8はシステインプロテアーゼをコードし、NEDD8が結合した基質に特異性を示す脱ネディル化酵素（deneddylase）として機能するとともに、NEDD8経路の恒常性維持に寄与します。SENP8は、カリリンRINGリガーゼ（CRL）のネディル化状態を調節することで、ユビキチン依存的なタンパク質分解回転、細胞周期進行、ストレス応答性シグナル伝達に影響を及ぼします。さらにSENP8の活性は、DCN1依存的なカリリンのネディル化ダイナミクスの制御や、全体的なプロテオスタシス制御とも関連しています。NEDD8サイクリングおよびカリリンリガーゼ活性の破綻は、がん原性の表現型や神経発達・神経変性過程と関連づけられており、SENP8は機序解明研究における重要なノードとなります。

SENP8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSENP8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SENP8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SENP8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SENP8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SENP8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SENP8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SENP8の機能に不可欠なSENP8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SENP8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SENP8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSENP8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SENP8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SENP8 HDRプラスミド（h）および SENP8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSENP8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSENP8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。