SEMA4A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422880

Panoramica

Sema4a codifica la semaforina-4A (SEMA4A), un segnale guida associato alla membrana che funge anche da ligando immunoregolatorio, influenzando la comunicazione cellula-cellula. Nei topi, SEMA4A contribuisce alla guida assonale e all’organizzazione delle sinapsi, modulando al contempo l’attivazione e la differenziazione delle cellule T e le interazioni con le cellule presentanti l’antigene attraverso reti di segnalazione delle semaforine e vie mediate da recettori. Questi processi si intrecciano con il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare e programmi di segnalazione infiammatoria che modellano l’omeostasi tissutale. Un’attività deregolata di Sema4a è stata associata a patologie a componente immunitaria e a meccanismi neuroinfiammatori, sostenendone lo studio in modelli di autoimmunità, neurobiologia e infiammazione dei tessuti di barriera.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema4a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema4a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema4a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA4A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema4a per lo studio della segnalazione di SEMA4A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema4a critici per la funzione di SEMA4A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema4a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema4a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA4A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA4A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema4a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema4a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.