SEMA4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422880

概要

Sema4a は、膜結合型のガイダンス因子であるセマフォリン-4A（SEMA4A）をコードしており、細胞間コミュニケーションに影響を与える免疫調節リガンドとしても機能します。マウスでは、SEMA4A は軸索ガイダンスやシナプス構築に寄与する一方、セマフォリンのシグナル伝達ネットワークや受容体介在性経路を介して、T 細胞の活性化・分化、ならびに抗原提示細胞との相互作用を調節します。これらの過程は、細胞骨格の再編成、細胞移動、炎症性シグナル伝達プログラムと交差し、組織恒常性の形成に関与します。Sema4a 活性の破綻は、免疫駆動性の病態や神経炎症メカニズムと関連づけられており、自己免疫、神経生物学、バリア組織炎症のモデルにおける研究対象としての重要性を支持しています。

SEMA4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSema4a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sema4a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sema4aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEMA4Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEMA4Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sema4a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEMA4Aの機能に不可欠なSema4aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sema4aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEMA4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEMA4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sema4a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEMA4A HDRプラスミド（m）および SEMA4A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSema4aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSema4a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。