Sclerostin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-428914-ACT

O gene **Sost** de camundongo codifica a **esclerostina**, uma glicoproteína secretada produzida predominantemente por osteócitos, que atua como um potente inibidor da sinalização canônica **Wnt/β-catenina** no osso. Ao se ligar aos co-receptores **LRP5/6**, a esclerostina antagoniza a ativação do receptor mediada por ligantes Wnt, restringindo a diferenciação de osteoblastos, a deposição de matriz e a mineralização do esqueleto, ao mesmo tempo em que contribui para a remodelação dependente de mecanotransdução. O Sost também participa de interações (crosstalk) com as vias de sinalização de **BMP** e **TGF-β**, que moldam programas gênicos osteogênicos e a homeostase óssea. A atividade desregulada da esclerostina está implicada em fenótipos de massa óssea alterada e oferece um ponto de entrada mecanístico para modelar o desenvolvimento esquelético, a remodelação e alterações na renovação óssea associadas à osteoimunologia.

Sclerostin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sost sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sclerostin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sost em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sost, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sclerostin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sost nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sclerostin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sclerostin em células tumorais com expressão de Sost silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.