Scleraxis CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422833

概要

Scxは、腱および靭帯の発生において系譜決定的な調節因子として機能する、塩基性ヘリックス–ループ–ヘリックス（bHLH）型転写因子であるscleraxisをコードする。Scleraxisは、細胞外マトリックス（ECM）関連遺伝子プログラムと腱系（tenogenic）分化を統合的に制御し、メカノトランスダクションやTGF-βをはじめとする増殖因子経路、ならびに線維芽細胞のアイデンティティ形成やマトリックスのリモデリングを規定する関連シグナルネットワークからの入力を統合する。マウスモデルでは、Scxの活性は結合組織の恒常性と密接に関連し、発生および修復過程におけるコラーゲンの配列、細胞移動、組織成熟に影響を及ぼす。Scxに関連する転写プログラムの破綻は、腱障害（tendinopathy）、線維化様のマトリックスリモデリング、ならびに筋骨格系損傷に対する応答の研究において重要である。

Scleraxis CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるScx遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Scx内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Scxのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Scleraxisタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Scleraxisシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Scx欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Scleraxisの機能に不可欠なScxエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Scxゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Scleraxis CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびScleraxis CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Scx遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Scleraxis HDRプラスミド（m）および Scleraxis HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはScxホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のScx標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。