Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SCCA1/2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418018
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SCCA1/2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SCCA1/2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SCCA1/2 Antibody (B-9): sc-28384
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SCCA1/2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-418018 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SERPINB4 codifica l’antigene del carcinoma a cellule squamose 1/2 (SCCA1/2), un inibitore delle serin-proteasi di clade B che modula la proteolisi intracellulare inibendo alcune catepsine e proteasi correlate. Limitando il turnover proteico guidato dalle proteasi e l’attività proteasica infiammatoria, SCCA1/2 influenza la differenziazione epiteliale, le risposte allo stress legate alla funzione di barriera e i programmi di segnalazione associati alle citochine. Un’espressione alterata di SERPINB4 è stata riportata negli epiteli squamosi e nei microambienti infiammatori, dove viene utilizzato come biomarcatore negli studi di biologia tumorale e infiammazione cronica. L’analisi funzionale di SERPINB4 supporta studi meccanicistici sull’equilibrio proteasi–antiproteasi, sulla sopravvivenza cellulare sotto stress e sul dialogo tra vie epiteliali e immunitarie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SCCA1/2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SERPINB4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SERPINB4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SERPINB4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SCCA1/2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SERPINB4 per lo studio della segnalazione di SCCA1/2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SERPINB4 critici per la funzione di SCCA1/2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SERPINB4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SCCA1/2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SCCA1/2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SERPINB4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SCCA1/2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SCCA1/2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SERPINB4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SERPINB4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.