Sarcospan CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421332

概要

Sspnはサルコスパン（sarcospan）をコードしており、サルコスパンはジストロフィン‐糖タンパク質複合体の一部を構成する4回膜貫通型タンパク質である。ラミニン結合受容体アセンブリーを安定化することでサルコレマの構築・維持に寄与する。骨格筋および心筋では、サルコスパンは収縮時の膜の完全性を支えるとともに、関連するサルコグリカンやインテグリンの分布・機能に影響を与えることでメカノトランスダクションにも関与する。サルコスパン依存的な複合体形成の異常は、筋の脆弱化や再生不全と関連づけられており、Sspnは筋ジストロフィー様表現型に関わる経路を研究するうえで有用な切り口となる。またサルコスパンは細胞外マトリックスとの相互作用や膜マイクロドメインの構造にも影響するため、筋線維損傷、炎症、リモデリングのモデルでしばしば解析対象となる。

Sarcospan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSspn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sspn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sspnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sarcospanタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sarcospanシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sspn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sarcospanの機能に不可欠なSspnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sspnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sarcospan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSarcospan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sspn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sarcospan HDRプラスミド（m）および Sarcospan HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSspnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSspn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。