SAMHD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424985-ACT

O gene murino Samhd1 codifica a SAMHD1, uma dNTP trifosfo-hidrolase que regula os reservatórios intracelulares de desoxinucleotídeos para manter a estabilidade do genoma durante a replicação e o reparo do DNA. Ao modular a disponibilidade de nucleotídeos, a SAMHD1 interage com a sinalização da resposta a danos no DNA, com vias de estresse replicativo e com o controle do ciclo celular, e pode influenciar o reconhecimento imune inato ao moldar a disponibilidade de substratos de ácidos nucleicos. Em linhagens mieloides e linfoides, a SAMHD1 é estudada por seus papéis na restrição da replicação de retrovírus e no controle de programas de sinalização inflamatória. A atividade desregulada de SAMHD1 tem sido associada a fenótipos aberrantes relacionados ao interferon, a respostas alteradas ao estresse genotóxico e a processos imunológicos e hematológicos relevantes para doenças em modelos experimentais.

SAMHD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Samhd1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SAMHD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Samhd1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Samhd1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SAMHD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Samhd1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SAMHD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SAMHD1 em células tumorais com expressão de Samhd1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.