SA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423170

概要

マウスStag1は、コヒーシン複合体の中核構成因子であるSA-1をコードしており、姉妹染色分体の接着、高次クロマチン構造の形成、ならびに有糸分裂および減数分裂における正確な染色体分配を制御する。SA-1は、長距離クロマチンループ形成を調節し、DNA複製および修復過程を協調させることで、ゲノム安定性の維持と転写制御に寄与する。これらの機能を通じてSTAG1は、細胞周期チェックポイントやDNA損傷応答経路とも関連し、異数性、染色体不安定性、ならびにコヒーシン関連の発生表現型の研究において重要である。SA-1を含むコヒーシンサブユニットの破綻や制御異常は、臨床的転帰を示唆するものではなく、遺伝子発現プログラムの変化や腫瘍生物学との関連という観点からしばしば検討されている。

SA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるStag1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Stag1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Stag1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SA-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SA-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Stag1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SA-1の機能に不可欠なStag1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Stag1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Stag1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SA-1 HDRプラスミド（m）および SA-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはStag1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のStag1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。