RUNX2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419482-NIC

Runx2 は転写因子 RUNX2 をコードしており、マウスにおける骨芽細胞系譜へのコミットメントおよび骨格形態形成を統括するマスター制御因子である。RUNX2 は骨基質遺伝子の発現を協調的に制御し、BMP/TGF-β シグナル伝達、Wnt/β-カテニン活性、MAPK 経路からの入力を統合して、骨形成分化、細胞外マトリックスの沈着、ならびに石灰化を制御する。発生過程にとどまらず、RUNX2 活性の変化は骨リモデリングの破綻と関連し、病的石灰化や、EMT 様遷移および骨指向性転移を伴う腫瘍細胞プログラムにも関与すると示唆されている。これらの特性により、Runx2 は系譜特異化、骨におけるメカノトランスダクション、ならびに疾患関連状況での転写ネットワーク再編を研究するための、広く用いられる重要なノードとなっている。

RUNX2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Runx2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Runx2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Runx2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Runx2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。