RUNX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419483-ACT

Runx1 codifica o fator de transcrição relacionado a Runt, RUNX1, um regulador central da hematopoiese definitiva que controla o comprometimento de linhagem e a maturação de células-tronco e progenitoras hematopoéticas. O RUNX1 atua em redes transcricionais com cofatores como o CBFβ e integra sinais de vias de sinalização para coordenar a acessibilidade da cromatina, a atividade de enhancers e os programas do ciclo celular durante a diferenciação mieloide e linfoide. Em modelos murinos, alterações na dosagem ou na atividade de Runx1 perturbam o desenvolvimento sanguíneo, afetam a homeostase de células imunes e estabelecem ligações mecanísticas com a leucemogênese e com fenótipos de falência da medula óssea. Este gene é frequentemente estudado em vias que governam a autorrenovação de células-tronco, pontos de controle de diferenciação e a desregulação transcricional oncogênica.

RUNX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Runx1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RUNX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Runx1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Runx1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RUNX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Runx1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RUNX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RUNX1 em células tumorais com expressão de Runx1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.