RPA135 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402818

概要

POLR1Bは、核小体で47S前駆rRNA（pre-rRNA）の合成を担うRNAポリメラーゼIの触媒サブユニットのうち、2番目に大きいRPA135をコードしている。RPA135はリボソーム生合成の中核を成し、増殖因子シグナルや栄養状態をrDNA転写に結び付けることで、核小体の構造、細胞周期の進行、プロテオスタシスとも関連する。Pol I転写が攪乱されると、p53依存性チェックポイントへと収束する核小体ストレス経路が活性化し、全体的な翻訳プログラムを再編し得る。rRNA産生の破綻やリボソーム生合成の変化は、増殖状態やストレス適応状態に繰り返し見られる特徴であり、POLR1BはrDNAの転写制御と核小体機能を研究するうえで有用な結節点となる。

RPA135 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPOLR1B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POLR1B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POLR1Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RPA135タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RPA135シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POLR1B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RPA135の機能に不可欠なPOLR1Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、POLR1Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RPA135 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRPA135 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POLR1B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RPA135 HDRプラスミド（h）および RPA135 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOLR1Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOLR1B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。