RP58 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407058

概要

ZBTB18は、ジンクフィンガーおよびBTBドメインをもつ転写抑制因子RP58をコードしており、神経発生、細胞運命の規定、分化を司る遺伝子発現プログラムを調節する核内レギュレーターである。RP58は、コリプレッサー複合体を動員し、系譜特異的な転写ネットワークを形成することで、増殖や成熟に影響を与えつつ、クロマチンに関連した転写制御に寄与する。ヒト細胞では、ZBTB18/RP58活性の変化が、神経発生過程の制御不全や、疾患状況で観察される異常な転写状態と関連づけられており、遺伝子制御アーキテクチャの研究において重要である。下流の作用は、神経細胞の成熟、細胞周期動態、エピジェネティックなプログラミングを制御する経路と交差している。

RP58 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZBTB18遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZBTB18内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZBTB18のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RP58タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RP58シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZBTB18欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RP58の機能に不可欠なZBTB18エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZBTB18ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RP58 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRP58 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZBTB18遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RP58 HDRプラスミド（h）および RP58 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZBTB18ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZBTB18標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。