RP105 Double Nickaseプラスミド (h): sc-409643-NIC

ヒトCD180は、Toll様受容体（TLR）ファミリーの一員であるRP105をコードしており、MD-1と複合体を形成して、B細胞および抗原提示細胞における自然免疫シグナル伝達の制御因子として機能します。RP105は、リポ多糖（LPS）をはじめとする微生物由来シグナルに対する応答を調節し、下流のNF-κBおよびMAPK経路の活性を形作ることで、サイトカイン産生、増殖、生存に影響を及ぼします。TLR4関連シグナルの作動閾値やB細胞の活性化状態を制御する役割を通じて、CD180は、自己免疫、感染症生物学、ならびにB細胞駆動性の悪性腫瘍といった文脈で観察される炎症制御や免疫調節異常の研究において重要です。RP105の発現やシグナルのバランスの変化は、異常な免疫活性化や液性免疫応答の変動と関連づけられており、自然免疫と獲得免疫のクロストーク機構を解析する上で有用な標的（ノード）となります。

RP105 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD180 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD180内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD180の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD180が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。