ROS-GC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404483

Panoramica

GUCY2D codifica ROS-GC1, una guanilato ciclasi recettoriale legata alla membrana che sintetizza cGMP in risposta a segnali intracellulari di Ca2+ trasmessi da proteine attivanti la guanilato ciclasi. Nei fotorecettori della retina, ROS-GC1 favorisce il recupero e l’adattamento ripristinando i livelli di cGMP che regolano l’attività dei canali regolati da nucleotidi ciclici all’interno della cascata di fototrasduzione. Questo enzima integra l’omeostasi del calcio con la segnalazione dei secondi messaggeri per modulare l’eccitabilità di membrana e l’output sinaptico. La disregolazione o varianti patogene di GUCY2D sono associate a malattie retiniche ereditarie, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sulla segnalazione del cGMP e sulla funzione dei neuroni sensoriali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ROS-GC1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GUCY2D in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GUCY2D insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GUCY2D a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ROS-GC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GUCY2D per lo studio della segnalazione di ROS-GC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GUCY2D critici per la funzione di ROS-GC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GUCY2D per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ROS-GC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ROS-GC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GUCY2D. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ROS-GC1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ROS-GC1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GUCY2D per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GUCY2D definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.