ROS-GC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404483

概要

GUCY2D は ROS-GC1 をコードしており、ROS-GC1 は膜結合型の受容体グアニル酸シクラーゼとして、グアニル酸シクラーゼ活性化タンパク質によって伝達される細胞内 Ca2+ シグナルに応答して cGMP を合成します。網膜の視細胞では、ROS-GC1 は光受容伝達カスケード内で環状ヌクレオチド依存性チャネルの活性を制御する cGMP 濃度を回復させることで、応答の回復と順応を支えています。この酵素はカルシウム恒常性とセカンドメッセンジャーシグナル伝達を統合し、膜の興奮性とシナプス出力を調整します。GUCY2D の機能異常や病原性バリアントは遺伝性網膜疾患と関連しており、cGMP シグナル伝達および感覚ニューロン機能の機構研究における重要な標的となっています。

ROS-GC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGUCY2D遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GUCY2D内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GUCY2Dのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ROS-GC1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ROS-GC1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GUCY2D欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ROS-GC1の機能に不可欠なGUCY2Dエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GUCY2Dゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ROS-GC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびROS-GC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GUCY2D遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ROS-GC1 HDRプラスミド（h）および ROS-GC1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGUCY2Dホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGUCY2D標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。