RNF186 Double Nickase Plasmid (h): sc-408416-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RNF186 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RNF186 Double-Nickase-Plasmid (h) und RNF186 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RNF186 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RNF186 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408416-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF186 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408416-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF186 kodiert eine im endoplasmatischen Retikulum lokalisierte RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die zur Regulation der Proteinqualitätskontrolle und von Signalwegen beiträgt, indem sie die Ubiquitin-Übertragung auf spezifische Substrate katalysiert. Über ubiquitinabhängigen Abbau sowie die Modulation von ER-Stress- und Entzündungssignalen kann RNF186 die epitheliale Homöostase, barriereassoziierte Prozesse und immunresponsive Signalwege wie NF-κB-gekoppelte Netzwerke beeinflussen. Genetische und funktionelle Studien haben Varianten von RNF186 und veränderte Expressionsniveaus mit einer erhöhten Anfälligkeit für inflammatorische Phänotypen in Verbindung gebracht, insbesondere im gastrointestinalen Kontext, was seine Relevanz für die Aufklärung von Mechanismen unterstreicht, die Proteostase mit der mukosalen Immunregulation verknüpfen. Als Knotenpunkt der ubiquitinvermittelten Regulation wird RNF186 in humanen Zellmodellen häufig hinsichtlich seines Einflusses auf Substratstabilität, Stressantworten und nachgelagerte Transkriptionsprogramme untersucht.
RNF186 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RNF186-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RNF186 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RNF186-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RNF186-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.